SERVICIOS Y UNIDADES DE APOYO

UNIDAD DE INVESTIGACIÓN EN NEURODESARROLLO

Realiza el diagnóstico y la neurohabilitación temprana en recién nacidos expuestos a factores de riesgo de daño cerebral en la etapa prenatal y perinatal.

INFORMACIÓN GENERAL

La Unidad de Investigación en Neurodesarrollo “Dr. Augusto Fernández Guardiola», también conocida como Laboratorio Universitario de Neurodesarrollo, realiza el diagnóstico y la neurohabilitación temprana en recién nacidos expuestos a factores de riesgo de daño cerebral en la etapa prenatal y perinatal.

Si el daño cerebral es diagnosticado en los primeros meses de vida y se inicia una terapia neurohabilitatoria de inmediato, existe una mayor probabilidad de disminuir o prevenir las secuelas que provoca el daño cerebral debido a la alta plasticidad cerebral existente en este periodo de la vida.

En el Laboratorio se lleva a cabo un cuidadoso seguimiento de los lactantes a través de evaluaciones neuropediátricas, sensorimotoras, electroencefalográficas, de potenciales evocados visuales y auditivos, imagen por resonancia magnética, de la atención, el desarrollo del lenguaje, la nutrición y la evaluación del neurodesarrollo.

Con la finalidad de evaluar el desarrollo motriz, sensorial, cognoscitivo y social de estos niños, el protocolo contempla el seguimiento de los casos hasta los ocho años de edad.

Las líneas de investigación del Laboratorio procuran generar conocimiento alrededor del desarrollo cerebral humano en los primeros años de vida, con su consiguiente utilidad en la aplicación clínica para diagnosticar y prevenir las secuelas del daño cerebral, así como el desarrollo e implementación de herramientas de diagnóstico temprano.

BENEFICIOS DEL PROGRAMA DE INVESTIGACIÓN

1. Los niños neurohabilitados tendrán una calidad de vida personal, familiar y social mejor, lo cual tendrá un impacto profundo en su desarrollo escolar/laboral y por ende en el ámbito socioeconómico.

2. El tratamiento preventivo temprano es mucho más eficiente y menos costoso que el tratamiento tardío de las discapacidades.

3. La consolidación de un grupo multidisciplinario enfocado al desarrollo de programas eficientes que ayuden a disminuir la incidencia de individuos discapacitados, mediante la reducción de las secuelas provocadas por daños cerebrales, a través de una intervención temprana o preventiva.

4. Desarrollar investigación y nuevo conocimiento en el área de plasticidad cerebral, así como en nuevos métodos de prevención, diagnóstico y tratamiento de lesiones cerebrales.

UNIDAD DE ANÁLISIS CONDUCTUAL

La Unidad de Análisis Conductual tiene la finalidad de proveer asesoría, espacio y equipo especializado a estudiantes, técnicos académicos e investigadores que lo requieran. Tiene también como objetivo la interacción entre investigadores con experiencia en el análisis de la conducta y otros con menor experiencia en ese rubro, por lo que promueve la colaboración y culminación de proyectos multidisciplinarios.

SITUACIÓN ACTUAL

La Unidad de Análisis Conductual (UnAC) ofrece un espacio equipado para realizar tareas conductuales en ratas y ratones. Proporciona asesoría técnica, tecnología de seguimiento de video y software especializado. El equipamiento científico permite una batería completa de ensayos en los que se evalúa el aprendizaje y la memoria, la función motora, la ansiedad y la depresión, así como el registro de calorimetría indirecta.

Las actividades de la UnAC fomentan la interacción entre investigadores con experiencia en el análisis de la conducta y otros con menor experiencia, por lo que promueve las colaboraciones de proyectos multidisciplinarios.

El espacio físico que ocupa la UnAC consta de diversas salas de análisis y alojamiento temporal y tiene las características esenciales para garantizar los servicios y la óptima operación de los equipos. Los espacios de análisis conductual son sonoamortiguados, tienen iluminación blanca y roja, cuentan con temporizadores de iluminación y un sistema de ventilación y control de temperatura ambiental con especificaciones para Bioterio basados en la Norma Mexicana vigente.

UNIDAD DE MICROSCOPÍA

Realizar estudios y análisis de muestras biológicas y de materiales utilizando diversas técnicas de microscopía.

INFORMACIÓN GENERAL

La Unidad de Microscopía del Instituto de Neurobiología de la UNAM tiene como objetivo
apoyar las labores de investigación científica y académica, en el campo de la microscopía
fotónica, confocal, multifotónica, de super-resolución y electrónica de transmisión.
Se tienen microscopios ópticos fotónicos compuestos de fluorescencia, microscopios
confocales (uno de ellos equipado con un laser multifotónico) y un microscopio electrónico de
transmisión. La Unidad de Microscopía también dispone de equipo semiautomatizado para
procesamiento (fijación, deshidratación e infiltración) corte y tinción de muestras biológicas
usando parafina y resinas epóxicas.

Microscopía CONFOCAL

El microscopio láser confocal es un microscopio óptico que incluye como fuente de luz un láser y un sistema electrónico que ayuda a la captura de imágenes. El principio de la microscopia confocal se basa en eliminar la luz reflejada o fluorescente procedente de los planos fuera de foco, donde se ilumina una pequeña zona de la muestra y se toma el haz luminoso que proviene del plano focal, eliminándose los haces procedentes de los planos inferiores y superiores (Boyde, 1988).

Microscopio confocal Zeiss LSM 780 DUO

El uso de este equipo es poder implementar técnicas sofisticadas de imagenología confocal multifotónica en el animal en vivo y la visualización de eventos celulares altamente dinámicos.
El cabezal LSM 780 provee al sistema confocal la capacidad de detectar prácticamente todos los fluoroforos que existen actualmente en el mercado, cuenta con un láser Argón Multilínea  (emisión 458-488-514nm), láser DPSS emisión en 561nm y láser HeNe emisión 633nm, mientras que el cabezal LIVE tiene dos láser de diodo para 489nm y 532nm. Además de estar equipado con estos dos cabezales, cuenta con dos módulos NDD (non-descanned detector) para la generación de armónicos secundarios.

Este sistema está compuesto por un microscopio vertical AxioImager Z2 con objetivos de 10x, 25x (multi-inmersión) 40x, 63x (ambos de inmersión en aceite), platina motorizada y software Zen by Zeiss.

MICROSCOPÍA ÓPTICA Y DE FLUORESCENCIA

MICROSCOPIO ÓPTICO – LEICA
Microscopio vertical de luz transmitida cuenta con una cámara integrada ICC50 HD a color con ranura para SDcard, cuenta con objetivos de 4x,10x, 40x y 100x de inmersión en aceite, tiene acoplado una computadora con sistema operativo Win 7 y software para obtener imágenes LAS EZ ver 3.0 by Leica.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES Y FLUORESCENCIA – NIKON
Microscopio vertical modelo Eclipse E-600 cuenta con objetivos de 4x,10x, 20x, 40x, 100x (inmersión en aceite), tiene adaptado una cámara modelo CoolSnap de alta velocidad blanco y negro. Con este microscopio se pueden observar las técnicas de campo claro, campo oscuro, contraste de fases y fluorescencia. Además se pueden obtener imágenes panorámicas de cortes histológicos gracias al condensador y los objetivos 1x y 2x. Para la técnica de fluorescencia el microscopio posee una lámpara HB-1010 con filtros para observar DAPI (405nm) GFP (488nm) Rhodamine (565nm). Para la obtención de imágenes se utilizan el software IPLab para Windows.

MICROSCOPIO PARA FLUORESCENCIA APOTOME – ZEISS
Microscopio AxioImager vertical con cámara de alta velocidad AxioCam, platina motorizada y cabezal Apotome, el cual puede obtener imágenes en el plano Z logrando profundidad al momento de reconstruir las imágenes. Además, cuenta con el módulo MosaiX donde se capturan imágenes en mosaico, con un máximo de1000 filas por 1000 columnas. Cuenta con objetivos de10x, 25x (multi-inmersión) 40x y 63x de inmersión en aceite, filtros para fluorescencia en DAPI (405nm) / GFP (emision 488nm) / Rhodamine (565nm) / Alexa 594 (600nm). Este microscopio tiene una computadora adaptada con el software de captura AxioVision ver. 4.8 by Carl Zeiss.

SERVICIO DE HISTOLOGÍA

Como parte de los procesos de apoyo y fortalecimiento a la investigación, la Unidad de Microscopía ofrece el servicio de técnicas histológicas para la visualización y análisis de tejidos en distintas condiciones fisiopatológicas.
Para lo cual la unidad cuenta con los siguientes servicios de área de histología:

• Deshidratación
• Inclusión
• Cortes de tejidos en Micrótomo, Criostato y Vibratomo
• Técnicas de tinción
• Técnicas de inmunohistoquímica e inmunofluorescencia
• Capacitación y certificación para el uso de equipos del área de histología
• Asesoría para el análisis cuantitativo de las secciones histológicas

Para solicitar los servicios del área de histología se pone a disposición de los usuarios el formato de Solicitud de servicio de Histología, formato para la Solicitud de Uso de Equipos de Histología y la Carta aval para Uso de Equipos de Histología.

UNIDAD DE PROTEOGENÓMICA

Desarrollo de diversas técnicas de Biología Molecular y de cultivo celular, de acuerdo con las necesidades de los usuarios.

INFORMACIÓN GENERAL

La Unidad de Proteogenómica cuenta con el equipamiento y material necesario para mantener y transfectar células eucariontes, para preparar células competentes, para preparar medios de cultivo para bacterias, entre otras técnicas moleculares, de acuerdo con las necesidades de los usuarios. Cuenta con diversos equipos muy especializados (STORM, Varioskan, LightCycler, ultracentrifuga Beckman, entre otros). La Unidad contiene un cuarto frio y espacios protegidos para trabajar con cultivos celulares y radioactividad.

La Unidad ofrece sus servicios tanto a usuarios internos como externos, brinda asesorías y materiales especializados en métodos bioquímicos y moleculares, y cuenta con un programa periódico de cursos teóricos-prácticos de biología molecular, PCR en tiempo real y bioinformática.

Además, la Unidad ofrece su apoyo a los usuarios internos y externos en el análisis bioinformático. Tenemos experiencia en ensamble de transcriptomas, expresión diferencial de genes, análisis de indels e identificación de proteínas novedosas y estamos dispuestos a expandir a otras técnicas de acuerdo a los requerimientos de los colaboradores. Los flujos de trabajo están diseñados en base a las necesidades de los usuarios y están disponibles para su uso en publicaciones cuando estos son requeridos por los revisores. Este servicio se ofrece sin costo a los investigadores y alumnos del INB.

De los trabajos realizados exitosamente en la Unidad se debe de dar el agradecimiento en los manuscritos publicados, resúmenes en congresos o presentaciones de la contribución de la M. en C. Adriana González Gallardo y/o el Dr. Michael C. Jeziorski y/o Dra. Anaid Antaramián Salas, según sea el caso.

SECUENCIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS

GENOTIPIFICACIÓN DE RATONES

En la Unidad de Proteogenómica se ofrece el servicio de Genotipificaciones de ratones transgénicos.
Consulte aquí el Protocolo de Genotipificación.

Costo del Servicio: 50.00 pesos M.N. por muestra

Requisitos para una nueva cepa diferente a las que se tienen estandarizadas:

1-2 mm de cola de ratón
• 50 microlitros de cada Oligonucelótidos para llevar a cabo el PCR (10mM)
• Protocolo de PCR.

CEPAS

PRODUCCIÓN DE VIRUS

La Unidad de Proteogenómica cuenta con el nuevo servicio de producción de adenovirus o lentivirus, producidos en células Hek 293T.
A continuación se relacionan los plásmidos con los que cuenta la Unidad:

• 20298  pAAV-EF1a-double-floxed-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE-
HGHpA  channelrhodopsin-2
• 20299  pAAV-EF1a-double floxed-mCherry-WPRE-HGHpA mCherry
• 20942  pLenti-EF1a-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE channelrhodopsin-2
• 20943  pLenti-CaMKIIa-hChR2(H134R)-mCherry-WPRE channelrhodopsin-2
• 20945  pLenti-Synapsin-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE channelrhodopsin-2
• 20949  pAAV-double floxed-eNpHR-EYFP-WPRE-pA halorhodopsin
• 26775  pLenti-hSyn-eNpHR 3.0-EYFP  eNpHR 3.0 (Homo sapiens)
• 26966  pAAV-Ef1a-DIO eNpHR 3.0-EYFP eNpHR 3.0 (Homo sapiens)
• 26970  pLenti-CaMKIIa-eNpHR 3.0-EYFP eNpHR 3.0 (Homo sapiens)
• 26971  pAAV-CaMKIIa-eNpHR 3.0-EYFP eNpHR 3.0 (Homo sapiens)
• 26975  pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-mCherry hChR2(H134R) (Homo sapiens)
• 26976  pAAV-hSyn-hChR2(H134R)-mCherry  hChR2(H134R) (Hs)
• 27054  pAAV-GFAP-hChR2(H134R)-EYFP hChR2(H134R) (Homo sapiens)
• 27055  pAAV-GFAP-hChR2(H134R)-mCherry hChR2(H134R) (Hs)
• 35497  pAAV-Ef1a-DIO C1V1 (t/t)-TS-EYFP
• 35500  pAAV-CaMKIIa-C1V1 (t/t)-TS-mCherry
• 35510  pAAV-Ef1a-DIO hChR2(E123T/T159C)-mCherry hChR2
• 35511  pAAV-CaMKIIa-hChR2(E123T/T159C)-EYFP hChR2
• 35512  pAAV-CaMKIIa-hChR2(E123T/T159C)-mCherryhChR2
• 35513  pLenti-CaMKIIa-eArchT 3.0-EYFP  eArchT 3.0-EYFP
• 35515  pLenti-CaMKIIa-Mac 3.0-EYFP  eMac 3.0-EYFP

VARIOSKAN DETECTOR MULTIMODAL DE 200-1000 NM

APLICACIONES SUGERIDAS
• Ensayos de Apoptosis
• Ensayos de flujo de Ca2+
• Proliferación celular
• Ensayos celulares
• Citotoxicidad
• Concentración de ADN
• Ensayos de ELISA/FIA/TRF-ELISA
• Estudios de cinéticas enzimáticas
• Ensayos FRET, TR-FRET, BRET, GPCR
• Ensayos de canales iónicos
• Ensayos de cinasas
• Ensayos de Multimarcaje
• Ensayos de genes reporteros
• Traducción de Señales
• Fluorescencia UV de triptófano y tirosina UV

CUARTO DE CULTIVO

La Unidad de Proteogenómica proporciona a sus usuarios un cuarto de cultivo que cuenta con el siguiente equipo:

• Campana de flujo laminar
• Campana de flujo laminar bioseguridad tipo 2
• 2 incubadoras de CO2 Binder
• Servibar Whirpool
• Balanza Sartorious
• Ultracentrifuga Beckman C7
• Centrífuga clìnica IEC Centra CL2
• Microscopio invertido Leyca

PCR DE 96 POZOS BIORAD C-1000 TOUCH

CARACTERÍSTICAS Y BENEFICIOS
Fácil y rápido protocolo de programación- 2 opciones de programación que incluyen un Protocolo Autoescrito, que genera protocolos ultra-rápido automáticamente estandarizados.
• Fácil edición de protocolos— Plantilla grande táctil a colores y navegación rediseñada que hace la edición y la corrida de los protocolos muy fácil.
• Plataforma flexible.
• Manejo avanzado de archivos— Compatible con memoria USB que permite trasferencia universal de protocolos y almacenamiento ilimitado de datos.
• Gradiente térmico — Identificación rápida y fácil de temperatura de apareamiento óptima usando gradiente de temperatura programable.

APLICACIONES Y USOS
• Amplificación/PCR
• Clonación
• Secuenciación
• Estudios de expresión génica
• Mutagénesis

PCR EN TIEMPO REAL

La Unidad de Proteogenómica cuenta con 2 equipos de PCR en tiempo real que se encuentran a disposición de los usuarios previa calendarización.

PCR Lightcycler Roche
32 Posiciones.
Utiliza capilares de vidrio de 20 microlitros. Cambios rápidos de temperatura. 3 longitudes de onda 530, 640 y 705 nm.

PCR StepOne Applied Biosystems
48 Pozos tubos de 200 microlitros.
El equipo Applied Biosystems StepOneTM Real-Time PCR System (sistema StepOneTM) utiliza productos químicos de PCR basada en fluorescencia para proporcionar:
• Detección cuantitativa de las secuencias de ácido nucleico mediante análisis de PCR en tiempo real.
• Detección cualitativa de secuencias de ácido nucleico mediante análisis de punto final y curva de desnaturalización.
El sistema StepOne recoge datos de fluorescencia brutos en diferentes puntos de una PCR, dependiendo del tipo de proceso que realice.

CLONACIÓN DE PRODUCTOS DE PCR

Requisitos
Traer 10-50 μl del producto de PCR

Costos
Costo por muestra clonada en pGEMT-EASY Promega: $500.00
Se entregarán las clonas de bacterias XL Blue (Stratagene) y una preparación mini del plásmido verificado con el producto de PCR clonado.

CLONACIÓN DE PRODUCTOS PCR

La Unidad de Proteogenómica cuenta con 2 equipos de PCR en tiempo real que se encuentran a disposición de los usuarios previa calendarización.

PCR Lightcycler Roche
32 Posiciones.
Utiliza capilares de vidrio de 20 microlitros. Cambios rápidos de temperatura. 3 longitudes de onda 530, 640 y 705 nm.

PCR StepOne Applied Biosystems
48 Pozos tubos de 200 microlitros.
El equipo Applied Biosystems StepOneTM Real-Time PCR System (sistema StepOneTM) utiliza productos químicos de PCR basada en fluorescencia para proporcionar:
• Detección cuantitativa de las secuencias de ácido nucleico mediante análisis de PCR en tiempo real.
• Detección cualitativa de secuencias de ácido nucleico mediante análisis de punto final y curva de desnaturalización.
El sistema StepOne recoge datos de fluorescencia brutos en diferentes puntos de una PCR, dependiendo del tipo de proceso que realice.

CLONACIÓN DE PRODUCTOS DE PCR

Requisitos
Traer 10-50 μl del producto de PCR

Costos
Costo por muestra clonada en pGEMT-EASY Promega: $500.00
Se entregarán las clonas de bacterias XL Blue (Stratagene) y una preparación mini del plásmido verificado con el producto de PCR clonado.

PREPARACIÓN DE PLÁSMIDOS MAXI

Requisitos
Traer la clona de interés en placa o glicerol.

Costos
Costo por muestra: $500.00
Se entregarán de 10 -20 μg del plásmido de interés.

CÉLULAS COMPETENTES

La Unidad proporciona a los usuarios viales con 50 μl de células competentes XL Blue de “Stratagene”.

MEDIOS

La Unidad produce de manera rutinaria los siguientes materiales:

Medio LB líquido.
Cajas de LB con 100 μg/μl de ampicilina.

FOTODOCUMENTACIÓN / STORM

La Unidad de Proteogenómica cuenta con un equipo “GEL DOC EZ Imager de Biorad» con cámara digital, transiluminador de luz UV y de luz blanca, acoplados a una laptop “gateway” para fotodocumentación de geles de agarosa y geles de poliacrilamida.

STORM
La Unidad cuenta con un equipo Molecular Dynamics Storm 860, para la detección con alta sensibilidad de señales luminosas, fluorescentes o radiactivas.